缓冲液贮液用5×tbe，具体配制方法见2.1.2.2，用时稀释5倍。凝胶母液用30%丙烯酰胺，具体配制方法见2.1.2.2。
10% 非变性聚丙烯酰胺凝胶（两块，约55 ml）各组分用量如下[58]：
30% 丙烯酰胺：18 ml
5×tbe：11 ml
超纯水：25 ml
temed：36 l
10% 过硫酸铵：385 l
具体操作步骤如下[75]：
首先，按要求组装好垂直电泳板，两块玻璃板的底部用1.5% 琼脂糖封边，防止封闭不严而导致聚丙烯酰胺胶液漏出。
然后，灌胶。分别量取配比用量的30% 丙烯酰胺、5×tbe和超纯水置于100 ml烧杯中，用玻璃棒搅拌混匀；然后用微量加样器加入配比用量的10% 过硫酸铵和temed，加入后聚合即开始，迅速摇匀；立即用玻璃棒引流，将混合液灌注于两块玻璃板之间，灌胶过程一次性完成，避免产生气泡；灌胶完成后，一次性平稳插入样梳以形成点样孔。
最后，待聚合完全后往电泳槽中加入1×tbe缓冲液直至没过点样孔，且正负极槽内缓冲液高度应一致。聚合时间一般在30～60 min左右，凝胶聚合完全的标志是点样孔附近形成清晰的界面，轻轻拔去样梳，避免破坏点样孔，并立即用电泳缓冲液冲洗点样孔，以清除点样孔中的气泡和未凝固完全的胶液。
取pcr扩增产物5 l与1 l上样缓冲液混合均匀后点入点样孔，用10% 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，以20 bp dna ladder（takara）作为分子量标准，缓冲液为1×tbe。接通电源，恒压180～200 v，电泳8～10 h，直至溴酚蓝距离凝胶边缘约1 cm时，停止电泳。
具体步骤如下[76-78]：
1）卸下玻璃板，用塑料薄片撬去上面一块玻璃板，并小心除去下方的琼脂糖凝胶；然后将附有聚丙烯酰胺凝胶的玻璃板以凝胶面朝下浸入盛有约200 ml超纯水的玻璃器皿中，凝胶即脱落于水中，轻轻摇晃15 sec，倒掉液体；
2）加入约200 ml 0.1% agno3，置于摇床之上，以轻摇20 min左右，倒掉液体；
3）加入约200 ml超纯水，轻摇15 sec，倒掉液体；
4）加入约200 ml显色液，轻摇5～10 min，直至出现清晰带型，倒掉液体；
5）加入约200 ml超纯水，轻摇15 sec，倒掉液体；
6）加入约200 ml 10% 冰乙酸，固定；
7）用bio-rad紫外凝胶成像系统观察，照相以记录电泳结果。
1.4.3 聚丙烯酰胺凝胶改进的银染方法。
1) 电泳结束后切断电源， 从电泳槽中倒出缓冲液， 然后取下胶板， 将凝胶从玻板中取出放入装有蒸馏水的瓷盘中， 用蒸馏水漂洗2 次。
2) 银染： 加入染色液(0.2%的agno%的冰醋酸、10%的无水乙醇)进行银染， 然后用蒸馏水漂洗2 次。20min
3) 显影： 加入显影液(3%的无水naoh, 每200 ml 溶液加1 ml 甲醛)进行显色。8min
4) 凝胶摄影： 用数码相机对凝胶进行照相。